Была сделана еще одна попытка объяснить, почему антитела к антигену не способны подавить пролиферацию Т-клеток. При этом исходили из пред-положения, что плотность антигена на поверхности макрофага обычно очень невелика. Рецептор Т-клеток и антитела к антигену конкурируют за доступные антигенные детерминанты. Можно думать, что начальное взаимодействие антител и Т-клеточного рецептора с антигеном — это равновесная реакция, однако если Т-клетка связалась с антигеном на поверхности макрофага, то между ней и макрофагом устанавливается прочный контакт, который уже не разрывается, i Другая возможность состоит в том, что аффинность Т-клеточного рецептора к комплексу антиген—1а значительно выше, чем у антитела; из-за редкого рас-положения антигенных детерминант на поверхности макрофагов связь антител с ними носит моновалентный характер. В любом случае антитела малоэффективно конкурируют с Т-клеточным рецептором за расположенный на поверхности макрофагов антиген.

Некоторое подтверждение последнему объяснению было получено в опытах по стимуляции Т-клеток макрофагами, модифицированными ТНФ-гаптеном. Естественно было думать, что ТНФ-детерминанта должна входить в состав анти-генного комплекса, распознаваемого Т-клетками, сенсибилизированными in vitro модифицированными ТНФ макрофагами, и что антитела к ТНФ в этом случае должны подавлять реакцию. Высокоактивная антисыворотка к ТНФ существенно подавляла вторичную пролиферативную реакцию Т-клеток мор- I ской свинки, примированных in vitro ТНФ-макрофагами [55]. Однако стиму- I лирующая способность макрофагов, модифицированных ТНФ, а затем инкуби-рованных 24 ч при 37° С («состаренных») перед добавлением к иммунным Т-клет-кам, оказалась нечувствительной к обработке антителами. Когда плотность [; гаптенных групп на поверхности таких состаренных макрофагов, модифициро- It-ванных ТНФ, повысили повторной обработкой ДНФ-гаптеном, распознаваемым антителами к ТНФ, но не Т-клетками, иммунизированными ТНФ-макрофагами, то пролиферативный ответ, индуцированный такими же дважды модифицированными клетками, эффективно подавлялся антисывороткой к ТНФ (табл. 5.13). Эти результаты свидетельствуют о том, что связывание с клеточной поверхно-

щ стью достаточного количества антител к гаптену приводит к подавлению реакции щ на ТНФ и что антигенные детерминанты, распознаваемые Т-клетками, экспрес-щ сированы на поверхности макрофагов. Можно предположить, что связывание щ большого количества антител к антигену с поверхностью макрофагов приводит Ц к активному удалению гаптенных детерминант путем кэппинга, эндоцитоза щ и слущивания (шеддинга).
Подход с использованием модифицированных гаптеном клеток был применен в опытах с макрофагами, «меченными» растворимыми белковыми анти-Ц генами. Было установлено, что антитела к ТНФ специфически ингибировали Ц пролиферативную реакцию Т-клеток на макрофаги, инкубированные с белко-щ выми антигенами, если макрофаги модифицировали ТНФ после (но не до) Ц инкубации с антигеном и если антиген содержал доступные e-NHjj-лизиновые К остатки, способные реагировать с ТНФ-реагентом [57]. Был сделан вывод, что Ц антитела к ТНФ подавляют пролиферацию Т-клеток, индуцируя кэппинг Ц и слущивание ТНФ-модифицированных детерминант антигена вместе с белками Ц поверхности макрофага, модифицированными ТНФ. В совокупности эти дан-щ ные, полученные с макрофагами, модифицированными гаптеном, а также с мак-
рофагами, «меченными* растворимыми белковыми антигенами и при этом модифицированными гаптеном, показывают, что неудачи опытов по выявлению дей-ствия антител к антигену на активацию Т-клеток объясняются скорее всего низкой плотностью антигенных детерминант на поверхности макрофагов. Вследствие этого связывание обычных и тем более моноклональных антител происходит по одновалентному механизму и оказывается недостаточно прочным для того, чтобы ингибировать устойчивое связывание Т-клетки с расположенным на поверхности макрофага антигеном.

Эти функциональные исследования сопровождались серией биохимических экспериментов, в которых определяли локализацию в клетке антигенов, ассо-циированных с макрофагами морской свинки [58]. Сначала макрофаги инкуби-ровали с триполимером L-глутаминовой кислоты, L-лизина и L-тирозина
(ГЛТ), меченным 1251, а затем через разное время после инкубации модифици-ровали ТНФ с помощью тринитробензилсульфоната (ТНБС). Поскольку ТНСБ
не проникает в клетки, в детергентном экстракте обработанных макрофагов легко отличить ГЛТ, расположенный на поверхности клетки (меченный 1251 и модифицированный ТНФ), от внутриклеточного ГЛТ (содержащего только 1251). Сразу после инкубации с ГЛТ макрофаги содержали ГЛТ как внутри, так и на своей поверхности. Если же макрофаги культивировали после инкубации в течение 3—24 ч, то ГЛТ обнаруживался только на клеточной поверхности. Наиболее важное значение этого исследования состояло в том, что оно помогло [ выяснить происхождение ГЛТ, ассоциированного с поверхностью таких клеток. I Подробный кинетический анализ показал, что ГЛТ, находящийся на поверхности макрофагов через 24 ч после инкубации, происходит из того ГЛТ, который обнаруживался на клеточной поверхности сразу после инкубации. Не было I получено никаких данных в пользу того, что поглощенный клетками ГЛТ [¦ в сколько-нибудь существенных количествах возвращается на клеточную по-верхность. Не было также никаких оснований считать, что ГЛТ избирательно сохраняется на поверхности клеток: скорость оборота поверхностного ГЛТ не отличалась от скорости оборота макрофагальных белков в целом. Хотя внутриклеточное распределение (компартментацию) ГЛТ и судьбу поглощенного ГЛТ в этой работе не определяли и, следовательно, нельзя исключить возмож-[. ность внутриклеточного процессинга ГЛТ в процессе инкубации, полученные данные не подтверждают предположения о том, что при культивировании макро-фагов в течение 3—24 ч антиген постоянно переносится из цитоплазмы на по-
верхность клетки. Эти результаты показывают, что важнейшие события в про-цессе переработки антигена макрофагами происходят на клеточной поверх-ности, хотя они могут быть и сложнее, чем просто пассивное связывание анти-гена с мембраной макрофага.