Как неоднократно подчеркивалось в этой главе, la-антигены макрофагов играют разностороннюю и важную роль в процессе активации Т-клеток: от функционирования в качестве молекулы, способной передавать сигнал, индуцирующий выработку монокинов в ответ на митогены, до их возможной роли в качестве специфической антигенсвязывающей молекулы, контролирующей функцию генов Ir. Несколько лет назад было обнаружено, что не все макрофаги экспрессируют 1а-антигены [79]. Так, например, только 15—25% очищенных макрофагов морской свинки, индуцированных введением масла, могли быть лизированы при обработке анти-1а-сывороткой и комплементом. Макрофаги, оставшиеся после такой обработки живыми, оказались неповрежденными и метаболически активными: они активно фагоцитировали латексные шарики. В то же время эти la-отрицательные макрофаги были в значительной степени лишены способности презентировать белковые антигены иммунным Т-лимфоцитам и функционировать в качестве стимулирующих клеток при смешивании с алло-генными Т-клетками в РСЛ (табл. 5.18). Таким образом, оказалось, что 1а-анти-гены экспрессируются на субпопуляции макрофагов, и эта субпопуляция играет основную роль в активации пролиферации Т-клеток в ответ на растворимые белковые антигены и аллоантигены.

Сходные результаты были получены при исследовании экспрессии анти-генов 1а мышиными макрофагами [80]. С помощью метода комплементзависи-мой цитотоксичности и протонного микрофлуориметрического анализа la-антигены удалось обнаружить в среднем у 8—15% клеток, имеющих морфологические и функциональные характеристики макрофагов и полученных из популяции перитонеального экссудата. Позднее Кауинг и др. [81] обнаружили, что доля la-положительных макрофагов заметно варьирует в зависимости от ткани, из которой были получены макрофаги (табл. 5.19). Среди прикрепляющихся клеток селезенки, имеющих морфологию макрофагов, 60—70% несли антигены f la, в то время как из макрофагов брюшной полости лишь 10—15% были 1а-поло-I жительными. Более того, оказалось, что экспрессию la-антигенов нельзя счи- тать стабильной характеристикой прикрепляющихся клеток селезенки, поскольку при культивировании в течение 7 дней экспрессия la-антигенов спонтанно прекращалась. Аналогично результатам, полученным на морских свинках, данные цитотоксических опытов с использованием комплемента и антител к la-антигенам показали, что функцию вспомогательных клеток выполняет субпопуляция макрофагов, несущих продукты субрайонов I-A и 1-Е. Способность к осуществлению функций вспомогательных клеток также коррелировала с долей клеток, экспрессирующих la-антигены; прикрепляющиеся клетки селезенки были гораздо более активными вспомогательными клетками, чем прикрепляющиеся клетки из брюшной полости.

Приведенные результаты убедительно показывают, что между наличием la-антигенов и способностью функционировать как вспомогательная клетка имеется непосредственная связь. Эти исследования поднимают также ряд интересных вопросов, касающихся иммунобиологии функционирования вспомогательных клеток. Относятся ли la-положительные вспомогательные клетки к той же клеточной линии, что и la-отрицательные вспомогательные клетки? Или — при несколько иной формулировке вопроса — не отражает ли наличие или отсутствие la-антигенов стадию дифференцировки одной линии клеток?

чреезвычайно плодотворный подход для ответа на эти вопросы применили Беллер и сотр. [82, 83], детально исследовавшие, какую долю составляют 1а-1 положительные клетки среди макрофагов, полученных из различных источни-I ков. При этом исследовали также вопрос о том, как влияют на экспрессию I макрофагами la-антигенов различные иммунологические воздействия и другие I факторы среды. Были обнаружены изменения относительного числа 1а-положи-I тельных макрофагов в перитонеальных экссудатах при воздействии разных I стимулов (табл. 5.20). Те стимулы, которые вызывали обогащение перитонеаль-

того экссудата la-положительными клетками, были связаны по крайней мере частично с иммунологическими процессами. Вещества, вызывающие общее воспаление, такие, как минеральное масло или культуральный бульон, инду-цировали образование экссудатов, в которых не наблюдалось заметного изме-нения в соотношении la-положительных и la-отрицательных макрофагов. Иммунизация сильными антигенами, такими, как KLH или организмы Listeria,вызывали сдвиги в составе экссудата в сторону обогащения la-положительными клетками. Невозможность обнаружить значительное количество la-положитель-ных макрофагов в экссудатах, индуцированных неиммунологическим путем, нельзя объяснить более медленным развитием ответа. Пептон, тиогликолят и минеральное масло вызывали увеличение абсолютного числа la-положительных клеток, но никогда не повышали их относительного содержания.

Очень важен тот факт, что способность вызывать образование экссудатов, обогащенных la-положительными макрофагами, может переноситься иммунны-ми Т-клетками. Этот результат демонстрирует двойную роль Т-клеток в осуще-ствлении функционирования и регуляции вспомогательных клеток. Ia-положи-тельные макрофаги необходимы для активации антиген-специфических Т-клеток; после активации Т-клетки могут регулировать прямо или косвенно la-фенотип макрофагов. Иммуногенные стимулы, таким образом, могут регулировать появление la-положительных макрофагов как локально, так и системно. Исходя из этого, весьма вероятно, что la-антигены определяют не стабильную субпопуляцию макрофагов, а специфическую стадию развития клеточной линии моноцитов-макрофагов.

Детальный анализ механизмов, с помощью которых Т-клетки регулируют экспрессию 1а макрофагами, стал возможным после идентификации раствори-мого медиатора, освобождающегося при взаимодействии in vitro стимулирован-ных антигеном Т-клеток с макрофагами. Этот медиатор способен in vivo инду-цировать экссудаты, богатые la-положительными макрофагами [84]. Для выра-ботки этого медиатора, названного MIRF (от англ. macrophage la recruiting factor — фактор, рекрутирующий la макрофагов), требуется взаимодействие la-положительных макрофагов, иммунных Т-клеток и присутствие специфиче-ского антигена. Для образования и поддержания экссудата, содержащего боль-шое количество la-положительных клеток, требуются периодические инъекции этого фактора. Инъекция MIRF повышала долю la-положительных макрофагов от 10% (базальный уровень) до 50—90%. Этот ответ полностью исчезал, если до инъекции MIRF или иммунных Т-клеток мыши получали летальную дозу облучения. Перенос костномозговых клеток облученным мышам в значительной степени восстанавливал их способность реагировать на иммунологические сти-мулы, даже если переносимые клетки костного мозга предварительно освобож-дали от la-положительных клеток. Таким образом, для поддержания высокого содержания la-положительных макрофагов, индуцируемого MIRF, требуется наличие обновляемых стволовых клеток [85]. После облучения MIRF не вызывал превращения даже недавно образовавшихся la-отрицательных клеток в la-положительные. Тот факт, что MIRF не способны индуцировать образование la-положительной популяции у облученных животных, стимулированных тио-гликолятом, показывает, что зрелые макрофаги, даже совсем недавно поступившие из кровотока, не могут служить мишенью действия медиаторов, выделяемых Т-клетками. Видимо, превращение зрелых la-отрицательных макрофагов in situ в la-положительные не является основным механизмом образования in vivo la-положительного экссудата. Облучение, по-видимому, препятствует поступлению соответствующих клеток-мишеней.

Результаты, полученные при исследовании MIRF in vivo, в определенном отношении отличаются от результатов некоторых исследований, в которых было показано, что зрелые la-отрицательные перитонеальные макрофаги могут превращаться в la-положительные в культура под действием растворимых медиаторов. Лимфокин из стимулированных антигеном клеток селезенки животных, иммунизированных Trypanosoma cruzi, увеличивал экспрессию и синтез la-антигенов макрофагов, причем этот ответ характеризовался зависи
мостью от дозы и времени воздействия [86]. Пока неясно, все ли представители линии мононуклеарных фагоцитов усиливают экспрессию la-антигенов в ответ на медиатор, поскольку эти исследования проводились на клетках, индуциро-ванных протеиназным пептоном. Менее значительное увеличение экспрессии la-антигенов наблюдалось на обработанных медиатором резидентных макро-фагах брюшной полости и селезни.
Культуральная среда клеток селезенки, активированных конканавалином (Кон) А, также индуцировала экспрессию la-антигенов мышиными макрофага-ми in vitro [87]. Биохимическое исследование этого медиатора показало, что фактор, регулирующий la-антигены макрофагов, имеет такие же молекулярную массу, ИЭТ, а также гидрофобные и аффинные свойства, как и иммунный интерферон [ИФ-7]. Антисыворотка к мышиному ИФ-у нейтрализовала как активность ИФ-у культуральной среды, так и активность, регулирующую la-антиген макрофагов. Более того, частично очищенный ИФ-у индуцировал экспрессию la-антигена макрофагами in vitro. Эти результаты показывают, что in vivo в тканях с высоким относительным содержанием 1а-положительных клеток экспрессия la-антигенов макрофагов может индуцироваться и поддер-живаться при постоянном небольшом уровне образования ИФ-у. Взаимосвязь между MIRF и ИФ-у остается неясной и требует дальнейших биохимических исследований.

Предпринимались также попытки обнаружить медиаторы, понижающие экспрессию la-антигенов на макрофагах. В исследованиях на новорожденных животных, у которых количество la-положительных макрофагов очень невели-ко, было установлено, что продукт молодых реплицирующихся макрофагов подавляет экспрессию la-антигенов зрелыми макрофагами [88]. Недавно было обнаружено [89], что простагландины серии Е (ПГЕ) сильно ингибируют экс-прессию la-антигенов на макрофагах, индуцированных лимфокинами, и что тромбоксан В2 препятствует данному эффекту ПГЕ (табл. 5.21). Регуляция экспрессии la-антигенов простагландинами может быть важным контролирую-щим механизмом в индуктивной фазе иммунного ответа. Потеря 1а-антигена макрофагами после инкубации с ПГЕ сопровождалась снижением способности презентировать антиген иммунным Т-клеткам.Изучение индукции экспрессии la-антигенов лимфокинами in vitro показа-ло, что почти все la-отрицательные макрофаги могут быть превращены в la-положительные. Из этого, очевидно, можно сделать вывод, что 1а-позитивные и la-отрицательные макрофаги возникают из одной и той же линии клеток. Тем не менее недавно была предпринята попытка определить, разделяется ли линия фагоцитов на определенной стадии созревания на два отдельных субкласса, la-положительные и la-отрицательные клетки, т. е. существуют ли предшественники, дающие начало макрофагам, никогда не экспрессирующим la-антигены, и предшественники, из которых образуются макрофаги, способные экспрессировать la-антигены в зависимости от условий окружающей среды {90]. Макрофаги выращивали из костномозговых предшественников и определяли условия, в которых эти клетки начинают экспрессировать 1а-антигены.

Макрофаги, культивируемые в среде, кондиционированной L-клетками, оставались la-отрицательными, хотя и пролиферировали. Следовательно, у активно пролиферирующих клеток не наблюдается спонтанной экспрессии la-антигенов. После удаления ростовых стимулов небольшая доля макрофагов в течение непродолжительного времени спонтанно экспрессировала la-антигены. В присутствии же Т-клеточных лимфокинов экспрессия la-антигенов была более стабильной и наблюдалась у большинства макрофагов. Все предшественники макрофагов давали начало клеткам, способным экспрессировать la-антигены: после стимуляции Т-клеточными лимфокинами la-положительные макрофаги обнаруживались в 100% колоний. Эти результаты противоречат существо-ванию раздельных линий la-положительных и la-отрицательных макрофагов. По-видимому, имеется лишь одна линия мононуклеарных фагоцитов, регули-руемая различными индуктивными сигналами. До сих пор остается неясным, на каком этапе происходит изменение, в результате которого иммунные стимулы вызывают образование la-положительных экссудатов, а неиммунные стимулы — образование la-отрицательных экссудатов.