Хотя до сих пор мы предполагали, что во взаимодействие лимфоцитов с инкубированными с антигеном макрофагами вовлечены только специфичные Т-лимфоциты, примированные исследуемым антигеном, детальные исследова-ния Верделина и сотр. [76—78] показали, что это взаимодействие имеет значи-тельно более сложный и динамичный характер. В большинстве работ Т-лимфо-циты инкубировали с монослоем преинкубированных с антигеном макрофагов в течение нескольких часов, затем тщательно отмывали монослой средой и только потом Т-лимфоциты и макрофаги, оставшиеся на стекле, фиксировали глута-ральдегидом и готовили к микроскопии. После этого подсчитывали число специфично связавшихся клеток. Подход, предложенный Верделином, подразумевает добавление фиксатора в культуру без предварительного отмывания с той целью, чтобы сохранить не только специфические, но и неспецифические взаимодействия.

Этот метод показал, что физическое взаимодействие Т-клеток морской свинки и макрофагов осуществляется в составе кластера (комплекса) (рис. 5.5), состоящего из одного прикрепленного к стеклу макрофага, присоединенного к нему значительным участком своей поверхности центрального лимфоцита и нескольких периферических лимфоцитов, соединенных с центральным лимфо-цитом уроподами (рис. 5.6). Образование кластера начиналось с образования контакта между антиген-специфическим центральным лимфоцитом и несущим антиген макрофагом. Затем расположенные рядом лимфоциты, неспецифические в отношении антигена, с которым инкубировали макрофаги, присоединялись к центральному лимфоциту. Центральный лимфоцит (но не периферические) затем начинал синтезировать ДНК. В исследованиях, описанных выше, в кото-рых монослой тщательно отмывали перед фиксацией, обнаруживался только центральный лимфоцит.

Таким образом, в кластере имеют место два типа физического взаимо-действия: антиген-специфическое взаимодействие между макрофагом и цен-тральным лимфоцитом и антиген-неспецифическое взаимодействие между цен-тральным и периферическими лимфоцитами. Вряд ли поверхность центрального лимфоцита обладает просто неспецифической адгезивностью, поскольку ни гомологичные, ни гетерологичные эритроциты не прикрепляются к централь-ному лимфоциту. Микрокинематографические исследования показали, что периферические лимфоциты сформировавшегося кластера взаимодействуют

с центральным лимфоцитом короткое время; затем они покидают кластер и заменяются новыми лимфоцитами, присутствующими в культуре. Условия взаимодействия центрального лимфоцита с периферическими можно было ана-лизировать, встряхивая культуру с такой силой, чтобы взаимодействие цен-трального лимфоцита с периферическими нарушалось, а его связь с макрофагом оставалась неповрежденной [78]. Если затем в культуру добавляли достаточное число лимфоцитов, то восстановление кластеров происходило за 4—6 ч. Исследования такого рода показали, что периферические лимфоциты не должны быть иммунны к антигену, использованному для образования кластеров, и что во взаимодействии периферических лимфоцитов с центральным не существует ограничений по I-району. Более того, В-лимфоциты также могут входить в со-став кластера как периферические лимфоциты, хотя в этом случае не наблю-дается образования уропод.

Хотя физическое взаимодействие между центральным лимфоцитом и инку-бированным с антигеном макрофагом, по-видимому, играет решающую роль в активации антиген-специфических Т-лимфоцитов, значение связывания пери-ферических лимфоцитов с центральным остается неясным. Возможно, это взаимодействие представляет собой физическое проявление механизма активации и размножения лимфоцитов, осуществляемого с помощью прямых физических

контактов, а не растворимых факторов. Это взаимодействие требует дальнейшего изучения и может играть важную роль in vivo в формировании зародышевых центров.