В качестве экспериментальной модели в этих исследованиях использовали взаимодействие макрофагов с бактерией Listeria топосу to genes и последующую презентацию бактериальных белков или пептидов Т-клеткам, полученным от животных, иммунизированных Listeria. При этом определяли интенсивность прикрепления иммунных Т-клеток к монослою макрофагов, инкубированных с бактериями [59]. Связывание Т-клеток с такими макрофагами начиналось после лаг-периода продолжительностью 30—60 мин от начала инкубации макрофагов с бактериями. Связывание и поглощение бактерий макрофагами происходило гораздо быстрее. Из этого следует, что одного лишь связывания недостаточно для создания ассоциированного с макрофагами иммуногена, необходимого для прикрепления Т-клеток. Процессинг антигена и его связывание можно разделить на основе их различной зависимости от температуры и энергии. Хотя связывание антигена макрофагами может происходить при 4° С или же в присутствии ингибиторов окислительного и гликолитического метаболизма, в этих условиях у макрофагов не развивается способность связывать антиген-специфические Т-клетки. Переработка бактерий, видимо, осуществляется аналогично процессингу растворимых белковых антигенов. Накопление иммунологически активного антигена происходит путем связывания антигена с мембраной и по-следующего зависящего от метаболизма процесса его переработки. Заметим, что кинетика катаболизма антигена тесно коррелирует с кинетикой образования вещества, связывающего Т-клетки. Появление способности связывать Т-клетки и катаболизм антигена подавляются при низкой температуре, истощении мета-болической энергии и фиксации клеток альдегидами. Модель, предложенная Зиглером и Унэнью [60], включает 1) первоначальное взаимодействие бактерий Listeria с поверхностью макрофага, происходящее с участием трипсин-чувстви-тельных рецепторов, 2) поглощение антигена в веде фагосом, 3) слияние фагосом с лизосомами и 4) протеолитическую деградацию антигена. Небольшие фраг-менты антигена, образовавшиеся под действием лизосомных протеиназ, затем высвобождаются и переносятся на поверхность макрофага в ходе процесса, напоминающего экзоцитоз.
Убедительное подтверждение этой последовательности событий было полу-чено в экспериментах с применением двух лизосомотропных агентов — ионов аммония и хлороквина [60]. Действие этих соединений сводится к нарушению нормального функционирования лизосом путем повышения лизосомного рН, а в результате и к подавлению активности кислых гидролаз. Хлороквин непо-средственно ингибирует активность катепсина В.1, а ионы аммония тормозят слияние фагосом и лизосом; оба агента ингибируют также рециркуляцию рецепторов. Ни хлороквин, ни хлорид аммония не подавляют поглощения макрофагами убитых нагреванием клеток Listeria. В то же время катаболизм бактерий, меченных 1251, ингибировался на 40—60%, о чем свидетельствовало уменьшение количества кислоторастворимой метки в культуральной среде. Вторая функция макрофагов, ослабляемая этими агентами,— презентация антигена. Если ионы аммония или хлороквин добавляли в среду за 30 мин до добавления бактерий, то антиген-специфическое связывание с макрофагами

иммунных Т-клеток значительно подавлялось (табл. 5-14). Если же макрофаги взаимодействовали с бактериями до добавления этих агентов в течение 30 мин при 37° С, то степень подавления была небольшой.Из этих результатов был сделан вывод, что ингибирующие эффекты использованных агентов связаны с их действием на процесс переработки антигена макрофагами, имеющий более важное значение для возникновения, чем для поддержания антигенности макрофагов. Ослабление способности презентиро-вать антиген строго коррелировало с избирательным подавлением его катаболизма. По-видимому, для презентации иммуногенов Т-клеткам необходим внутриклеточный процессинг молекул антигена. Возможно, что после расщепления антигена в лизосомах его фрагменты переносятся на доступные участки клеточной поверхности или выделяются во внеклеточную среду. Исходя из этих данных легко понять, почему антигенные детерминанты белков, распознаваемые Т-клетками, представлены денатурированными участками белков; подобные модификации белков, по всей видимости, происходят в результате их частичного расщепления в лизосомах.